A Envolve a adição da amostra clínica a anticorpos específicos aderidos a uma superfície sólida.
B Deve−se adicionar sempre um controle negativo, que será uma amostra negativa contendo somente antígeno marcado.
C Antígenos que não se ligaram são retirados por lavagens antes da adição de um segundo anticorpo marcado (conjugado), geralmente com uma enzima.
D Amplifica o sinal, por isso é mais sensível. Contudo, reações inespecíficas podem ocorrer.