A Osprimers forward(F) ereverse(R) devem apresentar sequências complementares entre si, para garantir a ligação na posição alvo do DNA.
B Quanto maior o número de bases Citosina (C) e Guanina (G) noprimer, mais fortemente “ligados” estarão oprimere o DNAtemplate. Logo, o conteúdo de bases C e G de umprimerdetermina a temperatura na qual a reação de pareamento deve ocorrer.
C A temperatura demelting(Tm) é a temperatura na qual ocorre o pareamento total entre primer e DNAtemplate.
D A temperatura de anelamento (Ta) é definida como a temperatura na qual metade dos fragmentos de DNA está na forma desnaturada, ou seja, não pareada, e a outra metade está pareada.