A Para preservação das amostras biológicas, o tempo de isquemia pós coleta é importante, pois a isquemia prolongada da peça, antes de sua fixação, pode levar à degradação de DNA, RNA e proteínas.
B O tempo de incubação das amostras com os anticorpos reagentes deve ser o mais curto possível para evitar ligações inespecíficas, e a temperatura de incubação deve ser elevada (> 60 °C) para garantir o maior número de ligações antígeno-anticorpo.
C Para a maioria dos tecidos, o tempo de fixação varia entre 48 e 240 horas em temperatura de geladeira (2 a 8 °C), e a quantidade do fixador deve estar em excesso em relação ao tecido, para garantir a fixação completa da amostra.
D Alguns tecidos e antígenos são mais vulneráveis à isquemia, nesses casos, a fixação prolongada poderá garantir mais qualidade à amostra biológica.