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#3702106

Durante o planejamento de um experimento de RT-qPCR para avaliar a expressão do gene GAPDH em células humanas, uma pesquisadora observou que um dos pares de primers amplificava tanto o DNA genômico quanto o DNA complementar. Outro par de primers, no entanto, produzia um único produto e ausência de amplificação no controle sem transcriptase reversa (-RT). Conforme os princípios empregados para o desenho de primers para amplificação de DNA complementar, assinale a alternativa correta.

  • Primersdesenhados em regiões intrônicas evitam a amplificação de DNA genômico, garantindo especificidade para o cDNA.
  • O uso deprimersque atravessam a junção éxon-éxon impede a amplificação do DNA genômico, assegurando a detecção exclusiva de transcritos.
  • A inclusão de regiões ricas em GC nosprimersaumenta a eficiência da reação e reduz o risco de amplificação genômica.
  • Primerscom complementaridade parcial a pseudogenes aumentam a sensibilidade e a especificidade da reação de qPCR.
  • O controle -RT é dispensável quando osprimersse localizam totalmente dentro de um éxon, pois o cDNA e o DNA genômico terão tamanhos idênticos de amplificação.
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