A ensaios PCR em Tempo Real quantativo são muito mais sensíveis, específicos e rápidos, principalmente quando comparados aos testes convencionais.
B ensaios PCR em Tempo Real quantativo baseados em reação multiplex permitem não só que mais de um alvo de interesse seja analisado na mesma reação, como também possibilita adicionar um controle interno, o qual validará individualmente cada reação
C a plataforma de PCR em tempo Real é composta por um termociclador, sistema óptico para excitação do fluoróforo e coleta de emissão (filtros de excitação e detecção), computador e sotware com capacidade de adquirir, armazenar e analisar os resultados.
D para todos os sistemas de PCR em Tempo Real, deve-se levar em consideração o background com multicomponente gerado para cada amplificação. Este ruído pode interferir no resultado final, sendo apenas causado por: degradação inespecíficada sonda, fluorescência residual do fluoróforo e diferenças na transparência dos tubos/placa.
E para garantir o estabelecimento de um teste de PCR em Tempo Real multiplex que seja reprodutível e sensível, é extremamente importante a padronização da reação, uma vez que diferentes alvos estarão competindo pelos íons de magnésio (cloreto e acetato), enzimas e dNTPs.