A O método espectrofotométrico clássico emprega o substrato p-nitrofenilfosfato, cuja hidrólise libera o p-nitrofenol, um cromóforo mensurável.
B O método fluorimétrico utiliza o substrato 4- metilumbeliferil-fosfato, cuja clivagem enzimática produz um composto não fluorescente.
C O método cinético baseado na taxa de consumo de ATP envolve a detecção da formação do produto inorgânico fosfato.
D O método turbidimétrico faz uso da precipitação do produto da reação enzimática, cuja turbidez é proporcional à atividade da fosfatase.