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#3106825

O 6º Padrão Internacional da OMS (Organização Mundial de Saúde) e National Institute for Biological Standards and Control (NIBSC), para RNA do vírus da hepatite C (HCV) para técnicas de amplificação de ácido nucleico (NAT), código NIBSC 18/184, é destinado para a calibração de reagentes de referência secundários contendo plasma de HCV processado em HCV NAT. O padrão compreende de plasma humano liofilizado e HCV. O HCV foi proveniente de uma doação de período de janela positivo para o genótipo 1a do RNA do HCV de alto título. O padrão foi liofilizado em alíquotas de 1,1 mL e armazenado a -20 °C. O material foi calibrado em Unidades Internacionais (UI), em paralelo com o 5º Padrão Internacional da OMS para RNA do HCV para NAT, em colaboração de um estudo envolvendo 19 laboratórios em todo o mundo. Apresentação do painel: 257.000 UI/frasco (5,41 log10 UI/frasco).
Incerteza: a unidade atribuída não carrega uma incerteza associada à sua calibração. A incerteza pode, portanto, ser considerada como sendo a variância do peso do frasco após o enchimento e foi determinada como sendo de +/- 0,19%. Sobre o painel é correto afirmar que:

  • para estabelecer um painel de 5 pontos com diluição seriada base 10 nas 3 primeiras diluições e base 5 nas duas últimas, o frasco liofilizado deve ser reconstituído em 1 mL de água livre de nuclease. Sugere-se: 1°diluição: 0,5mL NIBSC 18/184 reconsƟ tuído+ 4,5mL plasma verdadeiro negativo; 2°diluição: 0,5mL 1°diluição + 4,5mL plasma verdadeiro negativo; 3°diluição: 0,5mL  2°diluição + 4,5mL plasma verdadeiro negativo; 4°diluição: 1mL 3°diluição + 5mL plasma verdadeiro negativo; 5°diluição: 1mL 4°diluição + 5mL plasma verdadeiro negativo. Sendo as cargas virais esperadas do painel de diluição de 25700, 2570, 257, 51 e 10 UI/mL.
  • para estabelecer um painel de 5 pontos com diluição seriada base 10 nas 3 primeiras diluições e base 5 nas duas últimas, reconstituir como descrito na instrução de uso, sugere-se: 1°diluição: 1mL NIBSC 18/184 recostítuido+9mL plasma verdadeiro negativo; 2°diluição: 1mL 1°diluição + 9mL plasma verdadeiro negativo; 3°diluição: 1mL 2°diluição +9mL plasma verdadeiro negativo; 4°diluição: 2mL 3°diluição +8mL plasma verdadeiro negativo; 5°diluição: 2mL 4°diluição +8mL plasma verdadeiro negativo. Sendo as cargas virais esperadas do painel de diluição de aproximadamente 25700, 2570, 257, 51 e 10 UI/mL.
  • após a reconstituição do frasco a amostra terá 257 x 10^4 UI/frasco.
  • para estabelecer um painel de 5 pontos com diluição seriada base 10 nas 3 primeiras diluições e base 5 nas duas últimas, será esperado uma variação de valor de Ct entre os pontos de cerca de 3,3.
  • o painel NIBSC 18/184 deve ser processado sem diluição, pois qualquer processamento poderá interferir na calibração de UI/mL defi nida pelo NIBSC.
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