Uma região com cerca de 650 pares de bases
(pb) do gene mitocondrial COI, o qual codifica
para a subunidade I da enzima citocromo oxidase, é amplamente utilizada para identificar espécies animais por meio da técnica conhecida como
DNA barcoding.
Uma pesquisadora vai comparar as sequências dessa região em diferentes amostras de filé de peixes, provenientes de mercados locais, a fim de verificar se espécies cuja pesca é proibida estão sendo comercializadas. Ela irá obter os fragmentos do gene para o sequenciamento por meio da técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), utilizando iniciadores projetados para amplificar uma região do gene mitocondrial COI em diversas espécies de peixes. Com o intuito de estabelecer as condições ideiais para a amplificação de suas amostras, a pesquisadora realizou um teste inicial utilizando DNA de cinco amostras de peixes (P1 a P5) obtidas no mercado, além de um controle positivo (C+) e um controle negativo (C-) de reação. Como resultado desse teste, ela obteve a amplificação de dois fragmentos de pesos moleculares diferentes para cada amostra, visualizados como duas bandas coradas após eletroforese em gel de agarose, utilizando um marcador de peso molecular (PM), conforme a figura a seguir.
Considere as afirmativas a seguir sobre a PCR e o resultado obtido.
I → Esse resultado é esperado, pois os espécimes de peixes testados podem ser heterozigotos.
II → Para otimizar as condições da reação e obter a amplificação de um fragmento único, uma opção é aumentar a temperatura no passo de anelamento dos iniciadores durante a termociclagem.
III → Os reagentes que a pesquisadora usou na PCR possivelmente estão contaminados com DNA.
Está(ão) correta(s)
Uma pesquisadora vai comparar as sequências dessa região em diferentes amostras de filé de peixes, provenientes de mercados locais, a fim de verificar se espécies cuja pesca é proibida estão sendo comercializadas. Ela irá obter os fragmentos do gene para o sequenciamento por meio da técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), utilizando iniciadores projetados para amplificar uma região do gene mitocondrial COI em diversas espécies de peixes. Com o intuito de estabelecer as condições ideiais para a amplificação de suas amostras, a pesquisadora realizou um teste inicial utilizando DNA de cinco amostras de peixes (P1 a P5) obtidas no mercado, além de um controle positivo (C+) e um controle negativo (C-) de reação. Como resultado desse teste, ela obteve a amplificação de dois fragmentos de pesos moleculares diferentes para cada amostra, visualizados como duas bandas coradas após eletroforese em gel de agarose, utilizando um marcador de peso molecular (PM), conforme a figura a seguir.
Considere as afirmativas a seguir sobre a PCR e o resultado obtido.
I → Esse resultado é esperado, pois os espécimes de peixes testados podem ser heterozigotos.
II → Para otimizar as condições da reação e obter a amplificação de um fragmento único, uma opção é aumentar a temperatura no passo de anelamento dos iniciadores durante a termociclagem.
III → Os reagentes que a pesquisadora usou na PCR possivelmente estão contaminados com DNA.
Está(ão) correta(s)
