A Para a coleta da amostra, o recém-nascido não precisa ter sido amamentado nem ter recebido qualquer outro leite, e a coleta deve ser realizada após 48 horas do nascimento.
B Para assepsia da pele, deve-se usar álcool iodado, esfregar levemente e esperar secagem antes da coleta, e o recém-nascido pode ficar em posição verticalizada no colo da mãe ou do pai.
C A coleta é feita numa das laterais da região plantar do calcanhar, sem fazer pressão, sem garrotear o tornozelo e sem fazer movimentos de ordenha para forçar a descida do sangue.
D Deve-se preencher todos os círculos do papel-filtro e se o sangue não for bem absorvido, pode-se virar o papel-filtro para completar os círculos, a fim de evitar novas punções no recém-nascido.
E Após a coleta, o papel filtro pode permanecer até 7 dias na unidade em temperatura ambiente, não podendo ser colocado em geladeira devido ao risco de alteração do resultado.