A Oprimerreverso será desenhado a partir da fita positiva 5’-3’ do DNA, sendo que sua sequência 5’-3’ será complementar àquela da fita positiva, em orientação invertida.
B Para desenhar oprimer “foward”você precisará identificar o primeiro ATG da sequência codante desse gene e selecionará 10-20 nucleotídeos, a partir deste ponto, no sentido 5’-3’.
C Oprimerreverso deve ter, pelo menos, o dobro do tamanho doprimer “forward”para que a reação de amplificação possa funcionar corretamente.
D A temperatura de anelamento (tm) a ser utilizada na sua reação de PCR será determinada a partir do número de bases C/G presentes na sequência de cadaprimer.
E A fim de obter uma amplificação com alto grau de fidedignidade, é recomendado que se utilize uma Taq polimerase que tenha função revisora e corretora de nucleotídeos durante a síntese.