A pode ser empregado antes dos anticorpos, para aumentar o contraste das membranas em técnicas préinclusão.
B deve ser evitado em técnicas com ouro coloidal, para evitar a confusão entre a marcação com ouro e o contraste do tetróxido de ósmio nas membranas.
C é desaconselhado em técnicas pós-inclusão, para não bloquear os sítios antigênicos.
D deve ser empregado juntamente aos anticorpos, para favorecer sua ligação aos antígenos.