O teste de ELISA (ensaio imunossorvente ligado à enzima) é uma das técnicas laboratoriais mais comumente utilizada em imunologia. É um método de alta sensibilidade e especificidade, utilizado no diagnóstico de várias doenças, por exemplo, o HIV e a hepatite B. Analise os eventos a seguir, que ocorrem durante a execução dessa metodologia e ordene-os corretamente.

1. Remover o anticorpo não ligado.
2. Remover o anticorpo secundário não ligado.
3. Ligar o antígeno ao poço da placa.
4. Ligar o anticorpo circulante presente no soro do paciente ao antígeno.
5. Determinar a quantidade de anticorpo secundário ligado utilizando um espectrofotômetro, por meio de uma curva de calibração.
6. Adicionar anticorpo secundário (anticorpo anti-imunoglobulina humana) marcado.


Assinale a sequência correta.