A Os métodos proteômicos bottom-up (BU) permitem a identificação e a quantificação de centenas de linhagens de anticorpos diretamente de uma mistura policlonal.
B Nos métodos proteômicos bottom-up (BU), os anticorpos são digeridos enzimaticamente em peptídeos ionizáveis e analisados por cromatografia líquida (LC) acoplada com high-resolution tandem mass spectrometry (MS).
C Em contraste com a proteômica BU, as abordagens top-down (TD) dispensam a digestão de proteínas antes da análise por LC-MS/MS e, em vez disso, introduzem proteínas intactas no espectrômetro de massas.
D Uma tendência recente é usar uma abordagem middle-down (MD), na qual os anticorpos são digeridos em fragmentos de, aproximadamente, 50–100 kDa (Fab ou F(ab’)2), reduzindo assim a complexidade da amostra e melhorando a eficiência da separação de fragmentos individuais de anticorpos por LC.
E A abordagem BU para a análise do repertório de anticorpos humanos não supera o nível de sequência de resolução fornecido pelas técnicas proteômicas TD e MD.