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#3630602

Para realizar um levantamento abrangente do repertório celular, são necessárias técnicas de alto rendimento visando atingir a quantidade de sequenciamento necessária para uma amostragem representativa, a qual é normalmente na escala de 100.000 a 10.000.000 de células por experimento.

Entre os últimos avanços nessa área, há o método conhecido como LIBRA-seq (linking BCR to antigen specificity through sequencing), o qual consiste em 

  • solar células B ligadas a um painel de antígenos marcados com fluorescência e com código de barras usando citometria de fluxo, sendo que essas células são processadas e analisadas por Cryo-EM.
  • isolar células B ligadas a um painel de antígenos marcados com fluorescência e com código de barras usando citometria de fluxo, sendo essas células então processadas para identificar suas sequências BCR em microplacas, seguida de sequenciamento pelo método Sanger.
  • solar células B ligadas a um painel de antígenos marcados com fluorescência e com código de barras usando imunocromatografia, seguida de sequenciamento de Sanger para identificar suas sequências BCR e uso de imunofluorescência para identificar os antígenos com código de barras ligados a cada célula.
  • isolar células B ligadas a um painel de antígenos marcados com fluorescência e com código de barras usando citometria de fluxo, sendo essas células então processadas usando a plataforma 10X Genomics para identificar suas sequências BCR e os antígenos com código de barras ligados a cada célula.
  • isolar células B ligadas a um painel de antígenos não marcados usando métodos de centrifugação, sendo essas células então processadas usando a plataforma 10X Genomics para identificar suas sequências BCR e os antígenos com código de barras ligados a cada célula.
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