A separação de proteínas constitui o primeiro passo para a análise desta classe de biomoléculas em diferentes amostras biológicas. A respeito dos métodos de purificação e separação de proteínas e as características moleculares que baseiam essas metodologias, numere a coluna da direita de acordo com a da esquerda. 

1. Carga elétrica 2. Tamanho 3. Densidade 4. Solubilidade 5. Afinidade

( ) Uma membrana semipermeável, contendo a mistura de proteínas, é introduzida em uma solução aquosa hipotônica e mantida sob agitação até o equilíbrio osmótico. ( ) O sobrenadante proteico, contendo proteínas solúveis, é centrifugado várias vezes com aumento progressivo de tempo e velocidade do processo. ( ) Durante o preparo da amostra, as proteínas são carregadas negativamente pela interação com um detergente aniônico, e migram por um gel polimérico impulsionadas por uma diferença de potencial. ( ) A fase estacionária é constituída por um ligante específico, formando um complexo ligante-proteínas, cujas interações são posteriormente rompidas, adicionando-se excesso de ligante ou pela alteração do pH do meio. ( ) As proteínas migram por um gel polimérico contendo um gradiente de pH. ( ) É possível observar um comportamento de salting in ou salting out da proteína diante de diferentes concentrações de sal em um meio aquoso.

Assinale a sequência correta.